วิธีการเตรียม Cagrilintide

เทคโนโลยีพื้นหลัง

คากริลินไทด์ เป็นอะไมลินแอนะล็อกที่ออกฤทธิ์ยาวนานชนิดใหม่ เนื่องจากเป็นตัวเอกที่ไม่สามารถคัดเลือกได้ของตัวรับอะไมลิน (AMYR) และตัวรับคู่โปรตีนแคลซิโทนิน จี (CTR) จึงเป็นโพลีเปปไทด์แบบไซคลิกที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน 38 ชนิด ลำดับประกอบด้วยกรดอะมิโน 38 ตัวและพันธะไดซัลไฟด์หนึ่งคู่ Cagrilintide สามารถลดน้ำหนักตัวและการรับประทานอาหารได้อย่างมาก และมีศักยภาพในการวิจัยเรื่องโรคอ้วน อะไมลินเป็นฮอร์โมนอีกชนิดหนึ่งที่เกี่ยวข้องกับความหิวและความอิ่มที่อยู่นอกเส้นทางการส่งสัญญาณ GLP-1

 

คากริลินไทด์ สามารถลดการบริโภคพลังงาน ควบคุมการเลือกอาหารและความชอบ ออกฤทธิ์ควบคุมกลูโคสโดยการหลั่งร่วมกับอินซูลิน ยับยั้งการปล่อยกลูคากอนภายหลังตอนกลางวัน และชะลอการขับถ่ายในกระเพาะอาหาร มีข้อได้เปรียบที่ชัดเจนในการรักษาโรคเบาหวาน โรคอ้วน กลุ่มอาการทางเมตาบอลิซึม โรคหัวใจและหลอดเลือด และด้านอื่นๆ และมีความต้องการและแนวโน้มการใช้งานในวงกว้าง

สูตรโครงสร้างทางเคมีของคากริลินไทด์

 

 

ข้อมูลพื้นฐาน

---

ชื่อจีน：卡格列肽

ภาษาอังกฤษNฉัน：คากริลินไทด์

หมายเลขบริษัท：GT-F064

CAS：1415456-99-3

Sลำดับ：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-เพ-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-เพ-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(ไดซัลไฟด์บริดจ์:cys4-cys9)

Mเกี่ยวกับโมเลกุลFออมูลา：C₁₉₄H₃₁₂N₅₄O₅₉S₂

Mเกี่ยวกับโมเลกุลน้ำหนัก：4409.01

 

วัตถุดิบที่ใช้สำหรับคากริลินไทด์

 

เส้นทางสังเคราะห์

---

ตามสิทธิบัตรที่เกี่ยวข้องสำหรับ Cagrilintide สามารถหาวิธีการสังเคราะห์ Cagrilintide ได้ กรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 7-8 ของลำดับคากริลินไทด์ถูกเลือกเป็นซูโดโพรลีน ไดเปปไทด์ Fmoc-Ala-Thr(โปร-มี-มี)-OH, กรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 10-11 ของลำดับเป็นซูโดโพรลีน ไดเปปไทด์ Fmoc-Ala-Thr(โปร-มี-มี)-OH และกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง 21-22 ของลำดับเป็นซูโดโพรลีน ไดเปปไทด์ Fmoc-Ser-Ser (โปร-ฉัน-ฉัน)-OH; ปฏิกิริยาการมีเพศสัมพันธ์จะดำเนินการที่ตำแหน่งที่เหลือตามลำดับกรดอะมิโน เปปไทด์เรซินถูกแยกออกเพื่อให้ได้คากริลินไทด์เชิงเส้น จากนั้นจะได้คาร์กริลินไทด์แบบดิบโดยวิธีไซคลิกไลเซชันของของเหลว และได้คากริลินไทด์ที่ผ่านการกลั่นแล้วโดยการเตรียมการทำให้บริสุทธิ์ การถ่ายโอนเกลือ การทำให้เข้มข้น และการทำให้แห้งแบบไลโอฟิไลเซชัน วิธีนี้ใช้ pseudoproline dipeptides สามตัวในการมีเพศสัมพันธ์ แม้ว่าจะช่วยแก้ปัญหาความยากในการมีเพศสัมพันธ์ที่เพิ่มขึ้นซึ่งเกิดจากการควบแน่นของเรซินได้ แต่ก็ทำให้ต้นทุนการผลิตเพิ่มขึ้น และเปปไทด์ที่ผ่านการกลั่นที่ได้จากกระบวนการนี้มีความบริสุทธิ์ค่อนข้างต่ำ ซึ่งไม่เป็นไปตามข้อกำหนดด้านคุณภาพสำหรับส่วนผสมทางเภสัชกรรมที่ออกฤทธิ์

แผนภาพการเตรียม คากริลินไทด์

 

(1)การเตรียมการของคากริลินไทด์เปปไทด์เรซิน

นำกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันตัวแรก 1.5 มิลลิโมล และ HOBT 1.5 มิลลิโมล ละลายด้วย DMF ในปริมาณที่เหมาะสมและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 0~15°C ใช้ DIC อีก 1.5 มิลลิโมล ค่อยๆ เติมลงในสารละลาย DMF ของกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันภายใต้การกวน และคนปฏิกิริยาเป็นเวลา 10 นาทีที่ 0~15°C เพื่อให้ได้สารละลายกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันที่ถูกกระตุ้น ซึ่งถูกพักไว้

 

ใช้อะมิโนเรซิน 0.5 มิลลิโมล (ระดับทดแทน 0.42 มิลลิโมล/กรัม) พองตัวด้วยสารละลาย DMF เป็นเวลา 60 นาที กำจัดการป้องกันด้วยสารละลาย Pip/DMF 20% เป็นเวลา 30 นาที ล้างและกรองเพื่อให้ได้เรซินที่จะทำปฏิกิริยา

 

เพิ่มสารละลายกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกันขั้นแรกลงในเรซินที่จะทำปฏิกิริยา ดำเนินการปฏิกิริยาคัปปลิ้งที่ 25~35℃ เป็นเวลา 120~300 นาที กรองและล้างเพื่อให้ได้เรซินที่มีกรดอะมิโนที่ได้รับการป้องกัน 1 ตัว: Fmoc-Pro-Resin

 

โดยใช้วิธีการเดียวกันกับข้างต้น เข้าถึงกรดอะมิโนหรือชิ้นส่วนที่ถูกป้องกันไว้ข้างต้นตามลำดับที่ 2 ถึง 38 ที่สอดคล้องกัน:Fmoc- Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-เซอร์(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-โปร-OH·H2O，Fmoc-โปร-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-โปร-OH·H2O，Fmoc-เพ-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-เซอร์(tBu)-OH，Fmoc-เซอร์(tBu)-OH，Fmoc-ของเขา(Trt)-OH，Fmoc-หาเรื่อง(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-โปร-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-อะลา-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-หาเรื่อง(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(ฉัน,ฉัน)โปร)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(ฉัน,ฉัน)โปร)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，เอฟมอค-ลีส(บอค)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，โมโน-เติร์ต-บิวทิล ไอโคซาเนดิโอเอต ให้ผลผลิตเรซินเปปไทด์คาร์เมกลิปติน 4.98 กรัม

 

(2)การเตรียมน้ำมันดิบคากริลินไทด์ เปปไทด์เชิงเส้น

ใช้คาร์ฟิลโซมิบเปปไทด์เรซิน 4.49 กรัม เติมสารละลายผสม TFA อัตราส่วนของสารละลายผสมคือ TFA:EDT/Tis/ฟีนอล/H₂O = 87.5:2.5:5:2.5:2.5 และปริมาณคือ 8 มล. ต่อกรัมของเรซิน กวนปฏิกิริยาที่ 20~30°C เป็นเวลา 3 ชั่วโมง กรองส่วนผสมปฏิกิริยาด้วยกรวยแกนทราย เก็บสิ่งที่กรอง ล้างเรซินด้วย TFA จำนวนเล็กน้อย 3 ครั้ง รวมสารกรอง เติม MTBE สำหรับการตกตะกอน ล้างตะกอนด้วย MTBE 3 ครั้ง และปั๊มให้แห้งเพื่อให้ได้ผงสีขาวนวล ซึ่งก็คือเปปไทด์คาร์ฟิลโซมิบเชิงเส้นดิบ 2.08 กรัม

 

(3)การเตรียมสารละลายเปปไทด์ไซคลิกไซคลิกดิบของ คากริลินไทด์

ใช้เส้นตรงดิบ 0.50 กรัมCอะกริลินไทด์เปปไทด์ เตรียมสารละลายเปปไทด์เส้นตรงแบบดิบที่ความเข้มข้น 5.0 มก./มล. เติมสารละลาย DMSO 5 มล. หยดลงใต้คน และทำปฏิกิริยาที่ 20~30°C เป็นเวลา 20 ชั่วโมงเพื่อให้ได้สารละลายเปปไทด์คากริลินไทด์แบบไซคลิกแบบดิบ

 

(4)การเตรียมการกลั่นCอะกริลินไทด์เปปไทด์

เอาน้ำมันดิบCสารละลายเปปไทด์ไซคลิก arraglitide และกรองด้วยเมมเบรนกรองพรุนขนาดเล็ก 0.45μm；

 

ทำให้บริสุทธิ์และเตรียมโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง และรวบรวมCเศษส่วนของอาร์รากลิปติน；

 

โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงถูกใช้สำหรับการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ พีคหลักหลังจากการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ถูกรวบรวมและตรวจพบความบริสุทธิ์โดยโครมาโตกราฟีของเหลวเชิงวิเคราะห์ สารละลายพีคหลักหลังจากการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ถูกรวมเข้าด้วยกัน ทำให้เข้มข้นภายใต้ความดันที่ลดลงเพื่อให้ได้สารละลายกรดอะซิติกที่เป็นน้ำของคาร์โบไทด์ ซึ่งถูกทำให้แห้งแบบเยือกแข็งเพื่อให้ได้คาร์โบไทด์บริสุทธิ์ 152.18 มก. ที่มีความบริสุทธิ์ 99.58% สิ่งเจือปนเดี่ยวสูงสุด 0.09% ผลผลิตรวม 31.87% และน้ำหนักโมเลกุล 4409.0

 

HPLC แผนภาพ

 

แผนภาพ MS

 

ตัวอย่างข้างต้นแสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกระบวนการสังเคราะห์คัปปลิ้งทีละขั้นตอน ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับโดยวิธีการที่จัดให้มีโดยการประดิษฐ์ปัจจุบันมีความบริสุทธิ์มากกว่า 99.0% และสิ่งเจือปนแต่ละรายการน้อยกว่า 0.1% ซึ่งปรับปรุงคุณภาพผลิตภัณฑ์และผลผลิตทั้งหมด กระบวนการนี้ง่ายและควบคุมได้ง่าย มีการพัฒนาทางอุตสาหกรรมในระดับสูง และมีคุณค่าในทางปฏิบัติและโอกาสในการใช้งานที่กว้างขวาง

ติดต่อเรา

---

กำลังค้นหา Cagrilintide สำหรับโปรแกรมของคุณหรือไม่? Cosperpharm เป็นพันธมิตรที่เชื่อถือได้ของคุณสำหรับมาตรฐานสารตัวกลางและสารเจือปน ติดต่อเลยวันนี้ เราพร้อมที่จะสนับสนุนโครงการของคุณตั้งแต่การวิจัยและพัฒนาไปจนถึงการผลิตเชิงพาณิชย์

 

โทรศัพท์: +86-18986204913

 

โทร: +86-027-83338163

 

อีเมล์: info@cosperpharma.com