5-อะมิโนฟลูออเรสซีน

5-Aminofluorescein (หรือที่เรียกว่า 5-AF หรือ Fluoresceinamine) ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเป็นรีเอเจนต์การติดฉลากเรืองแสง เอมีนปฐมภูมิของ 5-อะมิโนฟลูออเรสซีนสามารถทำปฏิกิริยากับหมู่คาร์บอกซิล (ผ่านการกระตุ้นด้วย EDC/NHS), อัลดีไฮด์, คีโตน หรือเอสเทอร์ที่ถูกกระตุ้น (เช่น เอสเทอร์ของ NHS) เพื่อสร้างส่วนเชื่อมต่อของเอไมด์หรืออิมีนที่เสถียร โดยแสดงค่าการกระตุ้นสูงสุดที่ ~490 นาโนเมตร (สูงสุด = 496 นาโนเมตรในบัฟเฟอร์บอเรต pH 8.5) และการปล่อยก๊าซสูงสุดที่ ~515 นาโนเมตร ส่งสัญญาณสีเขียวสดใสพร้อมความเสถียรทางแสงที่ดี และการเปลี่ยนแปลงของสโตกส์ประมาณ 40 นาโนเมตร ความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ขึ้นอยู่กับ pH โดยเพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง (pH 8-9) ซึ่งมีสาเหตุมาจากการเปลี่ยนแปลงสถานะโปรตอนของกลุ่มอะมิโน

5-Aminofluorescein พบว่ามีการนำไปใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยทางชีววิทยาและทางการแพทย์ ตั้งแต่การติดฉลากโปรตีนและแอนติบอดีไปจนถึงการสร้างระบบนำส่งยาแบบกำหนดเป้าหมายและเซ็นเซอร์เรืองแสง 5-Aminofluorescein ยังเป็นสารตัวกลางสำคัญในการสังเคราะห์ fluorescein isothiocyanate (FITC Isomer I) ซึ่งเป็นหนึ่งในรีเอเจนต์ที่ได้รับความนิยมมากที่สุดสำหรับการติดฉลากโปรตีน

พารามิเตอร์ผลิตภัณฑ์

หมายเหตุการเตรียมและการเก็บรักษา

โดยทั่วไป 5‑AF จะถูกสังเคราะห์โดยเริ่มจากกรด 4‑ไนโตรฟทาลิก ตามด้วยรีดักชัน (เช่น ด้วยไฮดราซีน/FeOOH) และการควบแน่นด้วยรีซอร์ซินอลในกรดมีเทนซัลโฟนิก ผลิตภัณฑ์ดิบเป็นส่วนผสมของไอโซเมอร์ 5 และ 6 ซึ่งแยกจากกันโดยการตกผลึก วิธีการสมัยใหม่ (ใช้ไมโครเวฟหรือเอนไซม์) สามารถปรับปรุงผลผลิตและลดผลพลอยได้ การทำให้บริสุทธิ์ขั้นสุดท้ายโดย HPLC ช่วยให้มั่นใจได้ถึงความบริสุทธิ์ ≥95% โดยมีโครงสร้างที่ยืนยันโดย NMR และ MS

การจัดเก็บ – สารประกอบไวต่อแสง อากาศ และความชื้น เก็บในภาชนะที่ปิดสนิทและกำจัดอาร์กอนที่อุณหภูมิ 4°C ในที่มืด สำหรับการเก็บรักษาระยะยาว (>6 เดือน) แนะนำให้ใช้แบบผง -20°C (คงตัวอย่างน้อย 3 ปี) สารละลายใน DMSO สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80°C เป็นเวลา 6 เดือนหรือที่ -20°C เป็นเวลา 1 เดือน หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ การขนส่งที่อุณหภูมิแวดล้อมเป็นที่ยอมรับได้หากป้องกันจากแสงและความชื้น

คำถามที่พบบ่อย (FAQ)

คำถามที่ 1: 5‑Aminofluorescein (5‑AF) และ FITC แตกต่างกันอย่างไร ฉันจะเลือกได้อย่างไร?

ตอบ: ทั้งสองชนิดเป็นสีย้อมสีเขียวเรืองแสง แต่กลุ่มปฏิกิริยาต่างกัน

● 5‑AF มีเอมีนหลัก (–NH₂) โดยต้องมีการเปิดใช้งานกลุ่มคาร์บอกซิลของเป้าหมาย (โดยใช้ EDC/NHS) ก่อนการผันคำกริยา เหมาะที่สุดสำหรับการติดฉลากโมเลกุลที่มีหมู่คาร์บอกซิลอยู่แล้ว

● FITC มีหมู่ไอโซไทโอไซยาเนต (–N=C=S) ที่ทำปฏิกิริยาโดยตรงกับเอมีนบนเป้าหมาย (เช่น ไลซีนที่ตกค้างในโปรตีน) โดยไม่จำเป็นต้องกระตุ้นการทำงานล่วงหน้า FITC สะดวกกว่าสำหรับการติดฉลากโปรตีนตามปกติ

● เลือก 5‑AF หากคุณต้องการการผันที่เน้นเฉพาะเจาะจง (เช่น ผ่านด้ามจับคาร์บอกซิล) หรือหากคุณวางแผนที่จะสังเคราะห์อนุพันธ์ของฟลูออเรสเซนต์แบบกำหนดเอง โดยทั่วไป FITC จะง่ายกว่าสำหรับการติดฉลากแอนติบอดีโดยตรง

คำถามที่ 2: สภาวะทั่วไปของปฏิกิริยาสำหรับการติดฉลากชีวโมเลกุลด้วย 5‑AF คืออะไร

ตอบ: วิธีการที่พบบ่อยที่สุดคือการมีเพศสัมพันธ์กับเอไมด์ โดยกระตุ้นกลุ่มคาร์บอกซิลบนโมเลกุลเป้าหมายด้วย EDC และ NHS (ในบัฟเฟอร์ MES หรือ PBS, pH 5.5–6.5) จากนั้นเติม 5‑AF และปรับเป็น pH 7.5–8.5 ฟักที่อุณหภูมิห้องหรือ 37°C เป็นเวลา 2-4 ชั่วโมง สำหรับเป้าหมายที่มีอัลดีไฮด์ (เช่น ไกลโคโปรตีน) ให้ใช้รีดักทีฟอะมิเนชันกับโซเดียมไซยาโนโบโรไฮไดรด์ สีย้อมที่ไม่ทำปฏิกิริยาสามารถกำจัดออกได้โดยการแยกเกลือหรือการฟอกไต อัตราส่วนฟันกรามของสีย้อมต่อโปรตีนที่ 5:1 ถึง 20:1 ถือเป็นจุดเริ่มต้นที่ดี

ทำไมต้องคอสเพอร์ฟาร์ม? – ข้อได้เปรียบทางการแข่งขันของเรา

ติดต่อเรา

ไม่ว่าคุณจะต้องการตัวอย่างขนาดเล็กสำหรับการทดลองนำร่องหรือปริมาณมากเพื่อการผลิตเชิงพาณิชย์ Cosperpharm ก็พร้อมที่จะช่วยเหลือคุณ ติดต่อเราวันนี้เพื่อหารือเกี่ยวกับข้อกำหนดของคุณสำหรับ 5-Aminofluorescein – และมาดูกันว่าเราจะช่วยขับเคลื่อนโครงการของคุณไปข้างหน้าได้อย่างไร